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荧光免疫分析的原理
点击次数:862 发布时间:2019-03-11
荧光免疫分析的原理
荧光免疫检测技术具有专一性强、灵敏度高、实用性好等优点,因此它被用于测量含量很低的生物活性化合物,例如蛋白质(酶、接受体、抗体)、激素(甾族化合物、甲状腺激素、酞激素)、药物及微生物等。
作为免疫分析法的一种,FIA同样存在两种模式,即竞争型和夹心型。其中竞争型(以标记抗原的竞争型为例)的测定原理是基于未标记的抗原(Ag)和标记抗原(Ag-L)竞争结合有限的抗体(Ab)而实现的免疫分析法。检测时,Ab和Ag-L的浓度是固定的。当未标记的Ag加到Ab和Ag-L的免疫混合物中后,Ag和Ab的结合使得Ag-L与Ab的免疫复合物的量减少。样品中存在的Ag越多,Ab结合的Ag-L便越少,从Ab-Ag-L免疫复合物的减少或游离Ag-L的增加,可以定量测定出样品中待测抗原的含量。其反应过程如下:Ag+Ag-L+Ab≒(Ag:Ab)+(Ag-L:Ab)
对夹心型免疫分析来说,其反应原理是在免疫反应的载体上固定过量的Ab,然后加入一定量的Ag,免疫反应后,再加入过量的标记抗体(Ab-L),以形成“三明治”式夹心免疫复合物。样品中存在的Ag越多,结合的Ab-L也越多,夹心免疫复合物的标记荧光信号就越强。反应过程如下:Ab+Ag≒Ab:Ag≒Ab:Ag:Ab-L。
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